МОДЕЛИРОВАНИЕ ЭНДОМЕТРИОЗА У ЛАБОРАТОРНЫХ КРЫС ОПЕРАЦИОННЫМ СПОСОБОМ

1. Планирование операции на живых животных

1. Получаем  соответствующее разрешение на работу с лабораторными животными.
2. Заказываем крыс и даем, по крайней мере, одну неделю акклиматизации к новой среде.
3. Крысы-самки, содержащиеся в отсутствие воздействия мужских феромонов, могут прекратить цикл. Используя клетки с открытым верхом, помещаем клетку для самок между двумя клетками для самцов, чтобы обеспечить регулярные циклы самок.
4. Проверяем, начался ли  цикл у крыс, путем анализа вагинальной цитологии ежедневно в течение, по крайней мере, одной  недели до операции.
   1. Используя восковой карандаш, делаем  восемь разделов на предметном стекле, чтобы можно было взять  вагинальные мазки от нескольких крыс .
   2. Промываем  влагалище 0,2–0,25 мл физиологическим раствором или дистиллированной водой с помощью пипетки. Обязательно помещаем пипетку прямо у входа во влагалище, так как стимуляция шейки матки с помощью пипетки может вызвать ложную беременность. Помещаем вагинальный лаваж на предметное стекло для анализа типов клеток.
5. Собираем, очищаем и стерилизуем все необходимое хирургическое оборудование для успешной асептической операции.
6. Подготовьте раствор пропофола (0,1 мл раствора на 100 г живого веса).
7. Готовим стерильный PBS с пенициллином (100 ЕД/мл) и стрептомицином (100 мкг/мл).

2. Подготовка операционной зоны для операции на крысе.

1. Подготавливаем операционную область, как описано ранее.
2. Готовим место для стрижки, разложив бритвы и хирургические скрабы.
3. Подготавливаем хирургическую область, поместив рециркуляционную грелку с горячей водой на хирургическую область, чтобы поддерживать температуру тела на протяжении всей операции. Помещаем стерильную водонепроницаемую прокладку на грелку с рециркуляцией горячей воды. Разложим хирургические инструменты, швы, стерильную стеклянную чашку Петри, стерильную марлю, зажимы для ран и аппликатор зажимов для ран на стерильном операционном поле.
4. Подготавливаем зону восстановления, поместив рециркуляционные грелки с горячей водой наполовину под пустой клеткой, чтобы позволить крысам уйти от тепла, если это необходимо.

3. Обезболивание и подготовка крысы к операции

1. Записываем  вес крысы и определяем стадию течки путем оценки вагинальной цитологии.
2. Делаем укол пропофола инсулиновым шприцом в брюшную полость ,делая складку кожи.
3. Адекватную глубину анестезии определяем по отрицательному ответу на раздражение пальца ноги. Используя бритвы, бреем место операции.
4. Дезинфицируем и подготавливаем место операции тремя чередующимися мазками хлоргексидинового скраба и 70% этанола.
5. Накрываем животное стерильным полем.

4. Перевязка матки

1. Делаем небольшой (~ 1 см) разрез по средней линии с помощью небольших ножниц или лезвия скальпеля, заканчивающегося на 0,5–1,0 см ростральнее входа во влагалище.
2. Вставляем закрытые ножницы в отверстие таким образом, чтобы лезвия находились между стенкой тела и брюшной стенкой. Аккуратно рассекаем область вокруг разреза, медленно открывая и закрывая ножницы, чтобы брюшная стенка была достаточно отделена от кожи. Оставшиеся видимые спайки между брюшной стенкой и кожей вокруг места разреза можно осторожно надрезать. Отсутствие адекватного тупого рассечения места разреза затруднит закрытие брюшной стенки.
3. Используя небольшие щипцы, аккуратно находим рог матки. Матка расположена дорсально по отношению к кишечнику, что мы видим при первом входе в место разреза. В некоторых случаях проще всего сначала определить местонахождение яичника и связанного с ним жирового тела яичника. Аккуратно тянем за рог матки и проводим под ним открытый пинцет, который будет служить втягивающим средством.
4. Аккуратно вставляем два кусочка 6-8 см черного плетеного шелкового шва 3-0 (без иглы) под растянутый рог матки.
5. Надежно перевязываем рог в маточно-трубном соединении (только каудальнее фаллопиевой трубы) и в маточно-цервикальном соединении (только ростральнее шейки матки), используя квадратный узел в каждом месте. Оставляем концы шва на этом этапе.
6. Вырезаем участок рога матки между двумя перевязками и помещаем ткань в стерильную стеклянную чашку Петри, содержащую ~ 100 мкл PBS, содержащего пенициллин (100 ЕД/мл) и стрептомицин (100 мкг/мл). Обрезаем концы шелкового шва в последнюю очередь. Если швы разошлись или появилось кровотечение, находим конец и завязываем еще один узел.

5. Подготовка  эндометриоидных имплантатов из иссеченной матки.

1. Во время манипуляций с иссеченной маткой накрываем живот стерильной марлей и при необходимости поддерживаем гидратацию стерильным PBS, содержащим пенициллин и стрептомицин.
2. Зачищаем иссеченный рог матки от жира.
3. При желании взвешиваем иссеченный рог матки.
4. Открываем рог матки, вставив одно лезвие маленьких ножниц (длина лезвия 14 мм) в просвет и аккуратно сдвинув ножницы вниз по рогу матки, удерживая рог пинцетом.
5. В стеклянной чашке Петри используем пуансон для биопсии 2 мм, чтобы вырезать три имплантата одинакового размера.

6. Ушивание эндометриоидных имплантатов в брюшной полости

1. Помещаем стерильную марлю непосредственно над местом разреза и тщательно смачиваем стерильным PBS, содержащим пенициллин и стрептомицин.
2. Маленькими гладкими щипцами аккуратно находим слепую кишку и продвигаем ее рострально вдоль тонкой кишки. Вырываем небольшой (4-5 см) участок кишки, отстоящий не менее чем на две артерии от слепой кишки, и располагают его веером на предварительно смоченной марле так, чтобы был хорошо виден артериальный каскад брыжейки кишки. Всегда держим кишечник влажным стерильным физиологическим раствором. Примечание: нельзя пользоваться зубчатыми щипцами при работе с кишечником.
3. Используем черный этилоновый шов 3-0 с иглой P-1, 11 мм, 3/8 круга, с обратным разрезом, чтобы аккуратно пришить один имплантат к артерии примерно в 0,5 см от кишечника.
4. Примечание: брыжейка кишечника покрыта тонким слоем брюшины. Осторожно делаем чистый проход через этот слой при наложении швов вокруг артерии. Медленно и осторожно протянем шов, чтобы не разорвать брюшину и не разорвать артерию.
5. Завязываем два узла по одному броску каждый, стараясь не затягивать шов слишком сильно, так как это может привести к потере кровотока и последующему некрозу кишечника и смерти. Обрезаем шов в пределах 2 мм от имплантата. Снова промываем кишечник, чтобы поддерживать гидратацию, прежде чем переходить к следующему имплантату.
6. Двигаясь в ростральном направлении, вытаскиваем следующие 3-4 см кишки и осторожно заменяем участок, который уже содержит имплантат. Пропускаем одну или две артерии из места предыдущего имплантата и зашиваем следующий имплантат. Повторяем для третьего имплантата.
7. Засовываем всю кишку в брюшную полость.

7. Закрытие операционной раны

1. Убедимся в том, что все органы примерно вернулись к своему анатомическому положению.
2. Используем викриловый шов с покрытием 3-0 непрерывным стежком, чтобы закрыть брюшную стенку.
3. Используем  зажимы для ран 9 мм, чтобы закрыть кожу.