Лабораторная диагностика ВИЧ/СПИДа

Задачами лабораторного обследования при постановке ВИЧ-инфекции являются:

• подтверждение диагноза ВИЧ- инфекции;
• определение степени иммуносупрессии (по абсолютному и процентному содержанию CD 4 и CD 8);
• выявление показаний к химиопрофилактике вторичных заболеваний;
• выявление жизненных показаний к неотложному старту антиретровирусной терапии;

Для подтверждения диагноза ВИЧ-инфекции чаще всего используют молекулярно-генетический метод (ПЦР), серологические методы (ИФА и ИБ), вирусологический метод и исследование иммунного статуса (количественная оценка CD-4 лимфоцитов).

1. В основе метода ПЦР (полимеразная цепная реакция) лежит уникальное свойство нуклеиновых кислот (как ДНК, так и РНК) – способность к саморепродукции, которая воспроизводится искусственно (in vitro).

Метод ПЦР  применяется для выявления ВИЧ у новорожденных детей, чьи матери являются ВИЧ-инфицированными; для выявления ВИЧ при сомнительном ИБ; для контроля концентрации ВИЧ в крови и для исследования крови доноров.

Метод ПЦР подразделяется на качественный и количественный.

Качественная ПЦР направлена на нахождение генетического материала ВИЧ (ДНК/РНК), то есть, содержится ли непосредственно вирус в крови.

Количественная ПЦР направлена на определение РНК ВИЧ типа 1 в плазме крови  с детекцией в режиме реального времени.

2. Серологическая диагностика. Проводится в 3 этапа.

Иммуноферментный анализ (ИФА) позволяет выявлять в крови суммарный спектр антител к структурным белкам вируса иммунодефицита человека. Только в том случае если исследуемая сыворотка или плазма дала дважды положительный результат в ИФА (1 и 2 этапы), она тестируется в подтверждающем тесте иммуноблоттинга (3 этап).

ИФА может дать как ложноотрицательный, так и ложноположительный результат.

• Ложноотрицательный результат ИФА возможен при свежем инфицировании, пока антитела к ВИЧ еще не выработались организмом больного.
• Ложноположительные результаты могут быть получены при обследовании больных хроническими заболеваниями и в некоторых других случаях: административная ошибка в клинике или лаборатории, вакцинации.

В отличие от ИФА иммуноблоттинг способствует обнаружению антител к индивидуальным белкам вируса. На основании результатов ИБ ставится окончательный диагноз ВИЧ-инфекции.

Только при обнаружении в сыворотке крови пациента антител к любым двум или трем гликопротеинам оболочки вируса иммунодефицита человека (gp41, gp120 и gp160) одновременно – пробы являются положительными. При отсутствии в сыворотке крови антител ко всем антигенам пробы оценивают как отрицательные и если в крови присутствуют антитела к одному гликопротеину ВИЧ или каким-либо другим его протеинам, пробы считают сомнительными и требуют проведения повторного исследования.

3. Выделение и идентификация культуры ВИЧ (вирусологический метод) – безошибочный критерий оценки инфицирования. В силу сложности проведения данный метод используют в научных целях  и, главным образом, трудных для диагностики случаях. Результаты анализа могут учитываться как положительные, отрицательные или сомнительные.

4. Исследование иммунного статуса.

При установлении диагноза ВИЧ-инфекции осуществляют, как правило, многократное исследование иммунного статуса в динамике для контроля за эффективностью терапии и течением заболевания.

Иммунный статус – комплекс количественных и функциональных показателей, отражающих состояние иммунной системы человека в данный момент времени.

Характерный признак исследования иммунного статуса - проведение его в несколько этапов:

1. Клинико-лабораторный – состоит из сбора иммунологического анамнеза и оценки развернутого клинического анализа крови;
2. Иммунологический этап – качественная и количественная оценка иммунокомпетентных клеток.

В целом, иммунограмма дает полное представление о состоянии иммунитета пациента. Она состоит из гуморального и клеточного исследования.